פּראָדוקטן

צו ספּאַסיפיקלי קוואַנטיפיצירן עטלעכע מעטאַבאָליטעס פון 5-פלואָראָוראַסיל (5-FU) און צוויי ענדאָגענאָוס מאָנאָפאָספאַטע נוקלעאָטידעס, מיר דעוועלאָפּעד אַן אָריגינעל אופֿן באזירט אויף פליסיק טשראָמאַטאָגראַפי - טאַנדעם מאַסע ספּעקטראָמעטרי (LC-MS / MS).דער אַססיי ערלויבט די באַשטימונג פון: (איך) די ינטראַסעללולאַר פּראָדוקציע פון ​​5-פלואָראָ-2'-דעאָקסיורידינע-5'-מאָנאָפאָספאַטע (5-FdUMP) פֿון 5-FU אָדער 5-פלואָראָ-2'-דעאָקסיורידין (5-FdUrd) , (ii) די פּראַל פון 5-FdUMP קאַנסאַנטריישאַן אויף די ינטראַסעללולאַר 2'-דעאָקסיורידינע-5'-מאָנאָפאָספאַטע (דומפּ) / טהימידינע-5'-מאָנאָפאָספאַטע (טמפּ) פאַרהעלטעניש, און (iii) די ויסשיידונג מאָס פון 5-FdUMP און 5-FU פון מענטש געבילדעטער סעלז דורך אַבק טראַנספּאָרטערס.אונטער אונדזער יקספּערמענאַל טנאָים, סעלז זענען ינקובייטיד מיט 5-FU אָדער 5-FUrd.דערנאָך, סעליאַלער פּראָטעינס זענען פּריסיפּיטייטיד דורך מעטאַנאָל.דעם פּראָצעדור צוגעשטעלט הויך יקסטראַקשאַן אָפּזוך.אין אַדישאַן, צו מעסטן 5-FU און 5-FdUMP ויסשיידונג פון סעלז, מיר האָבן קוואַנטאַפאַקיישאַן פון די מאַלאַקיולז אין קולטור מיטל.מעדיע זענען אָדער גלייַך ינדזשעקטיד (5-FU) אָדער אונטער אַ האַרט פאַסע יקסטראַקשאַן מיט אָאַסיס וואַקס יקסטראַקשאַן פּאַטראָן (5-FdUMP).סעפּאַראַטיאָן פון אַנאַליטעס איז געווען דורכגעקאָכט אויף אַ דק18 אַטלאַנטיס 3.5 μם (100 מם × 2.1 מם שייַן) זייַל מיט יסאָקראַטיק מאָדע ניצן אַמאָוניאַם פֿאָרמאַט באַפער / מעטאַנאָל / וואַסער (5/5/90, וו / וו) ווי רירעוודיק פאַסע.די לויפן צייט האט נישט יקסיד 6.2 מינוט.די אַנאַליטעס זענען ייאַנייזד אין אַן עלעקטראָספּריי צובינד אונטער נעגאַטיוו יאָן מאָדע.מיר וואַלאַדייטאַד דעם אופֿן איבער אַ קייט פון 2.5-150 נג מל -1 לויט די קאַמפּאַונדז.ינטער- און ינטער-אַסיי וועריאַביליטי איז געווען נידעריקער ווי 10% איבער זיבן טעג.אַלע קאַמפּאַונדז זענען סטאַביל אין סעלז אָדער אין קולטור מיטל ווען סאַמפּאַלז זענען סטאָרד בייַ -20 ° C פֿאַר בייַ מינדסטער צוויי וואָכן, און נאָך דרייַ פרירן-טאָ סייקאַלז.קיין מאַטריץ ווירקונג איז באמערקט אין ביידע מעדיע.